Southern Blot: Técnica en biología molecular

Significado de Southern Blot

Southern blot es una técnica de biología molecular que se utiliza para comprobar si una secuencia de ADN en particular está presente en una muestra de ADN analizada.

Esto se logra mejorando la electroforesis en gel de agarosa. La técnica recibió su nombre en honor a su creador, el biólogo británico Edwin Southern, lo que llevó al bautismo de otros métodos de blot con juegos de palabras al nombre de Southern (que significa "del sur"), como es el caso del Western blot (" oeste ") y Northern blot (" norte ").

Procedimiento

El procedimiento sigue los siguientes pasos:

Desnaturalización: el gel sobre el que se realizó la electroforesis de ADN se trata con una solución alcalina (generalmente compuesta de hidróxido de sodio) para dar lugar a la desnaturalización de la doble hebra de ADN, dividiéndolas en hebras simples.

La desnaturalización es esencial, ya que el ADN en los siguientes pasos se impregnará en la membrana y se emparejará con la sonda.

Transferencia de ADN a una membrana: se coloca una membrana compuesta de nitrocelulosa o nailon sobre el gel. Se aplica una presión uniformemente distribuida al gel, lo que da como resultado el paso del ADN presente en el gel a la membrana, donde se adhiere.

Luego, esta membrana se calienta (cuando está hecha de nitrocelulosa) o se expone a radiación ultravioleta (en el caso del nailon) para conectar permanentemente el ADN a la membrana.

Tratamiento con la sonda: en este paso se trata la membrana con una sonda de hibridación, que es una molécula de ADN aislada de secuencia conocida e idéntica, o complementaria, a aquella secuencia de la que se quiere determinar la presencia o no en la muestra.

La sonda de ADN está marcada de manera que permite su detección, y generalmente se realiza incorporando átomos radiactivos o uniéndolos a tintes fluorescentes o cromogénicos. En determinadas situaciones, la sonda hibridada se puede preparar con ARN en lugar de ADN.

Esta sonda se emparejará con cualquier secuencia de ADN que sea complementaria a ella. Así, si la secuencia buscada no está presente en la muestra en cuestión, no se producirá el emparejamiento.

Por tanto, cualquier exceso de sonda se lava de la membrana, eliminando toda la sonda no hibridada presente en ella, con presencia o no de la sonda evidenciado por una auto-radiografía en una película de rayos X, o por la apariencia de cierto color si se ha utilizado una marca cromogénica.